Odată ce celulele în care cultivăm

fabrica de celulesunt contaminate, majoritatea sunt greu de manevrat.Dacă celulele contaminate sunt valoroase și greu de obținut din nou, se pot folosi următoarele metode pentru a le îndepărta.

1. Folosiți antibiotice

Antibioticele sunt mai eficiente în uciderea bacteriilorfabrici de celule.Combinația de medicamente este mai eficientă decât medicamentele singure.Medicația preventivă este mai eficientă decât medicația după contaminare.Medicația preventivă utilizează în general un antibiotic dublu (penicilină 100u/mL plus streptomicina 100μg/mL).După contaminare, metoda de curățare trebuie să fie de 5 până la 10 ori mai mare decât cantitatea obișnuită.Medicamentul trebuie utilizat timp de 24 până la 48 de ore după adăugare și apoi înlocuit cu rutina obișnuită.Fluid de cultură.Această metodă poate fi eficientă în stadiile incipiente ale contaminării.Pe lângă penicilină și streptomicină, antibioticele utilizate pot include și gentamicina, kanamicină, polimixină, tetraciclină, nistatina etc. Utilizate în mod obișnuit sunt 400 până la 800 μg/mL kanamicină sau 200 μg/mL tetraciclină.Mediul este schimbat la fiecare 2 până la 3 zile și transmis timp de 1 până la 2 generații pentru tratament.În ultimii ani, s-a raportat că 4-fluoro, 2-hidroxichinolină (Ciprofloxacin, Cip), derivat de pleu-romutilină (derivat de pleu-romutilină, BM-Cyclin2: BM-1 și derivat de tetraciclină (BM-2)) Antibioticele sunt eficient în distrugerea micoplasmei atunci când este utilizat singur sau în combinație.Aceste trei antibiotice sunt toate preparate în soluții concentrate de 250X în PBS și depozitate la -20°C pentru utilizare ulterioară.Concentrația de utilizare Cip este de 10 μg/mL, BM-1 este de 10 μg/mL și BM-2 este de 5μg/mL.La utilizare, aspirați mai întâi mediul de cultură contaminat, adăugați mediu de cultură RPMI1640 care conține BM-1, apoi aspirați mediul de cultură după 3 zile, adăugați mediu de cultură RPMI1640 care conține BM-2 și cultura timp de 4 zile și așa mai departe timp de 3 zile consecutive .runde, până când se dovedește prin microscopie cu colorare fluorescentă 33258 că micoplasma a fost eliminată, apoi se adaugă mediu de cultură normal pentru cultură și trecere de 3-4 ori.

2. Tratament termic

Incubarea culturii de țesuturi contaminate la 41°C timp de 18 ore poate ucide micoplasma, dar are efecte adverse asupra celulelor.Prin urmare, înainte de tratament trebuie efectuat un test preliminar pentru a explora timpul de încălzire care poate ucide micoplasma în măsura maximă și are cel mai mic impact asupra celulelor.Această metodă este uneori nesigură.Dacă este tratat mai întâi cu medicamente și apoi încălzit la 41°C, efectul va fi mai bun.

3. Utilizați ser specific micoplasmei

Contaminarea cu micoplasmă poate fi îndepărtată cu ser imun de micoplasmă de iepure 5% (titru de hemaglutinare 1:320 sau mai mare).Deoarece anticorpul specific poate inhiba creșterea micoplasmei, acesta devine negativ la 11 zile după tratamentul cu antiser și rămâne negativ la 5 luni mai târziu.este negativ.Cu toate acestea, această metodă este mai deranjantă și nu la fel de convenabilă și economică ca utilizarea antibioticelor.

4. Alte metode

Pe lângă metodele menționate mai sus de eliminare a contaminării, există și metode de inoculare și sterilizare la animale, metode de fagocitoză cu macrofage, metode de adăugare a bromoracilului la contaminat.sticle de culturăși apoi iradierea lor cu lumină și metode de filtrare etc., dar toate sunt mai supărătoare și mai ineficiente.Prin urmare, odată ce are loc contaminarea cu micoplasmă, cu excepția cazului în care aceasta are o valoare deosebit de importantă, este în general aruncată și re-cultivată.

vă rugăm să contactați Whatsapp & Wechat: +86 180 8048 1709